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一、定義：
牛血清白蛋白（BSA），是牛血清中的一種球蛋白，包含607個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用。
二、主要成分
1、蛋白質(zhì)
是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類(lèi)蛋白外主要還有白蛋白，球蛋白。纖維粘連素細(xì)胞促進(jìn)細(xì)胞附著；α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用；胎牛血清中含胎球蛋白促細(xì)胞附著；轉(zhuǎn)鐵蛋白能結(jié)合鐵離子，減少其毒性和被細(xì)胞利用。
2、多肽
血小板促生長(zhǎng)因子能促細(xì)胞分裂，是多肽家庭的主要成員之一，是主要的促細(xì)胞增殖因子；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因子等，血清中含量雖很少，但對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)也有一定作用。
3、激素
激素對(duì)細(xì)胞的作用是多方面的。
胰島素：促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄糖和氨基酸，與促細(xì)胞分裂有關(guān)。
類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子：能與細(xì)胞表達(dá)的胰島素受體結(jié)合，從而有胰島素同樣的作用。
促生長(zhǎng)激素：促細(xì)胞增殖效應(yīng)。
4、其他成份
氨基酸、葡萄糖、酮酸等對(duì)多種營(yíng)養(yǎng)成分的合成培養(yǎng)基意義不大。與蛋白相結(jié)合狀態(tài)的微量元素對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有意義。
三、作用
BSA一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，因?yàn)橛行┟冈诘蜐舛认虏环€(wěn)定或活性低。加入BSA后，它可能起到“保護(hù)”或“載體”作用，不少酶類(lèi)添加 BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不會(huì)受到什么影響。對(duì)多數(shù)底物DNA而言，BSA可以使酶切更*，并可實(shí)現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃，酶切反應(yīng)超過(guò)1h時(shí)，BSA可以使酶更加穩(wěn)定，因?yàn)樵诓缓?/span>BSA的反應(yīng)緩沖液中，許多限制性?xún)?nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時(shí)間。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限制性?xún)?nèi)切酶活性的金屬離子和其它化學(xué)物質(zhì)。
緩沖液
1.BSA是酶的穩(wěn)定劑，防止酶的分解和非特異性吸附；
2.BSA能減輕有些酶的變性，能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性的，可能是因?yàn)樗Y(jié)構(gòu)中有17個(gè)二硫鍵，和一個(gè)巰基，巰基的化學(xué)反應(yīng)很活潑，二硫鍵有抗氧化還原的作用，因此可與多種陽(yáng)離子，陰離子和小分子結(jié)合；
3.BSA能防止酶吸附到管壁而損失。
四、用途
1、用于生化研究、遺傳工程和醫(yī)藥研究
2、用作醫(yī)藥保健食品、調(diào)味品
3、維持滲透壓、pH緩沖、載體作用
4、在PCR體系中有助于Taq酶的穩(wěn)定性及活性，可以提高PCR的效率
五、儲(chǔ)存方法
每10克加100毫升水進(jìn)行溶解，或用 PBS溶解也可，視用途而決定。然后分裝成小支。若不使用防腐劑可貯存在零下20或30攝氏度的恒溫柜中，若使用防腐劑則可貯存在零上4攝氏度的環(huán)境下。一般可存放數(shù)月不變質(zhì)。防腐劑可能對(duì)牛血清白蛋白的效果造成影響，應(yīng)慎用。
六、應(yīng)用
牛血清白蛋白（BSA）在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用, 例如在WB實(shí)驗(yàn)中加入BSA, 通過(guò)提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對(duì)酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性，減輕不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性的。
1、測(cè)定蛋白濃度
按50：1配置BCA工作液。10ulC液（蛋白標(biāo)準(zhǔn)）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標(biāo)準(zhǔn)液加入96孔板的第1~8標(biāo)準(zhǔn)孔中，在其他樣品孔中加入10ul待測(cè)樣品。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液，室溫放置2小時(shí)。用酶標(biāo)儀測(cè)定蛋白濃度：測(cè)定A562，依標(biāo)準(zhǔn)曲線算出蛋白濃度。
2、SDS-PAGE電泳
（1）制 膠: 按比例配制分離膠，緩緩地?fù)u動(dòng)溶液，使激活劑混合均勻，將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃極中，再在液面上小心注入一層水，以阻止氧氣進(jìn)入凝膠溶液中，靜置40min。同前按比例配制濃縮膠，但混勻溶液時(shí)不要過(guò)于劇烈以免引入過(guò)多地氧氣。吸去不連續(xù)系統(tǒng)中下層分離膠上的水分，連續(xù)平穩(wěn)的注入凝膠溶液，然后小心插入梳子并注意不得在齒尖留有氣泡，靜制60min以上以保證*聚合。
（2）預(yù)電泳： 將聚合好的凝膠安置于電泳槽中，小心拔去梳子，加入電泳緩沖液后低電壓10-20V的預(yù)電泳20-30min。（目的是清除凝膠內(nèi)的雜質(zhì)， 疏通凝膠孔徑以保證電泳過(guò)程中電泳的暢通）。
（3）樣品準(zhǔn)備：首先計(jì)算上樣體積，然后按樣品：上樣buffer=4：1的比例加入上樣bufer混勻，沸水10分鐘，冰上5分鐘。
（4）加 樣： 預(yù)電泳后依次加入標(biāo)準(zhǔn)品（Marker）和待分析樣品。（加樣時(shí)間要盡量短，以免樣品擴(kuò)散，可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應(yīng)。每個(gè)泳道加5ul 。
（5）電 泳： 加樣完畢，選擇80V恒壓進(jìn)行電泳，電泳直至溴酚藍(lán)染料前沿到達(dá)兩膠交界處（一般約20分鐘），更換至100V恒壓電泳，電泳直至溴酚藍(lán)染料前沿下至凝膠末端處，即停止電泳（一般約為1小時(shí)20分鐘）。
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